Dalam penentuan diferensial enterobacteria dan beberapa vibrio, reaksi Voges-Proskauer menempati tempat khusus. Pengujian didasarkan pada kemampuan bakteri untuk memfermentasi glukosa menjadi asetoin.
Inti dari proses penelitian
Dalam mikrobiologi, reaksi Voges-Proskauer sering digunakan untuk membedakan enterobakteri dalam keluarga Yersinia (termasuk patogen pseudotuberkulosis dan enterokolitis), Escherichia coli, dan aerob pembentuk spora. Hasilnya divisualisasikan dengan mewarnai media ketika reagen tertentu ditambahkan.
Tes ini termasuk dalam seri IMViC (singkatan dari Indol, Methyl Red, Voges-Proskauer i Sitrat) - sekelompok tes identifikasi termasuk definisi diferensial:
- dengan indol, berdasarkan pemecahan triptofan menjadi indol, digunakan dengan adanya reagen Kovacs atau Ehrlich;
- menggunakanmetilroth, atau metil merah, yang mendeteksi pH tertentu sebagai hasil metabolisme glukosa;
- Reaksi Voges-Proskauer untuk deteksi asetil-metilkarbinol;
- pemanfaatan sitrat dengan perubahan warna akibat alkalisasi medium.
Inti dari proses ini adalah visualisasi keberadaan bakteri yang didiagnosis karena interaksi asetoin yang dibentuk oleh mereka dengan kalium kaustik dengan adanya oksigen. Asetil-metilkarbinol dioksidasi menjadi diacetyl, yang membentuk senyawa merah terang atau merah muda. Tingkatkan sensitivitas tes dengan memasukkan alfa-naftol sebelum menambahkan kalium kaustik.
Pengaturan pengujian
Perumusan reaksi Voges-Proskauer melibatkan kultivasi awal mikroorganisme. Kultur murni ditaburkan pada media diagnostik diferensial Clark, variasinya adalah kaldu Clark (tanpa penambahan agar-agar). Baik media siap pakai digunakan, atau disiapkan secara mandiri. Bahan-bahannya antara lain:
- 5g pepton;
- 5g glukosa;
- 5g dibasic potassium phosphate;
- 1L distilat.
Selama penelitian, kultur diinokulasi dengan loop bakteriologis steril ke dalam media cair. Jumlah - 5 ml dalam tabung reaksi ditambah kontrol. Inkubasi dilakukan pada suhu 35-37 derajat selama dua hari. Selanjutnya, studi tentang reaksi Voges-Proskauer dilakukan secara bertahap:
- 2, 5 ml biakan kaldu dipindahkan ke tabung steril.
- Tambahkan enam tetes alfa-naftol (larutan alkohol 5%).
- Tambahkan 40%larutan kalium kaustik dalam jumlah 0,1 ml, atau dua tetes.
- Pengadukan dilakukan dengan mengocok tabung reaksi secara perlahan.
- Evaluasi hasil setelah 15 menit dari awal percobaan.
Metode pengujian alternatif adalah inkubasi semalam, yang waktunya dikurangi menjadi 18 jam atau hingga satu hari. Selain metode ini, uji ekspres juga digunakan: biakan dimasukkan secara melingkar ke dalam 2 ml medium, diinkubasi selama sekitar empat jam, kemudian ditambahkan reagen dalam jumlah yang sama sebanyak 2-3 tetes, dicampur dan hasilnya dievaluasi setelah sepuluh menit.
Kontrol adalah salah satu agen penyebab pneumonia Klebsiella pneumoniae - strain atcc 13883.
Evaluasi hasil
Setelah waktu yang diperlukan setelah menambahkan reagen (dari 5 hingga 15 menit), warna merah ceri harus diamati dengan reaksi positif yang diucapkan, merah dan merah muda - dengan reaksi positif yang lemah. Tidak ada perubahan yang dicatat sebagai hasil negatif.
Kelebihan kalium kaustik dalam larutan dapat memberikan tiruan reaksi positif, pewarnaan dalam warna tembaga. Dalam hal ini, respon negatif dari koloni yang diuji harus dicatat. Juga, pewarnaan tembaga muncul dalam kasus di mana penilaian diberikan satu jam setelah pengenalan reagen.
Saat mengevaluasi hasil, harus diperhitungkan bahwa kultivasi yang berkepanjangan dari mikroorganisme yang diteliti (lebih dari tiga hari) menyebabkan pengasaman media, yang dapat menyebabkan hasil penelitian yang salah. Reaksinya mungkin agak positif ataunegatif palsu.
Persyaratan untuk reagen uji
Reagen Voges-Proskauer harus memenuhi persyaratan seperti konsentrasi yang benar, kemurnian tinggi dan stabilitas, yang dicapai melalui penyimpanan yang tepat.
Kit uji siap pakai biasanya berisi reagen untuk 100 penggunaan atau lebih dan tersedia dalam botol plastik atau kaca berwarna. Kualitas diatur oleh dokumentasi yang relevan.
