Berbagai infeksi bakteri memerlukan identifikasi patogen yang jelas dan definisi spesiesnya. Untuk menentukan jenis mikroorganisme, ahli mikrobiologi dibantu oleh sifat tinctorialnya - kerentanan mikroba terhadap pewarnaan dengan berbagai pewarna. Metode ini memungkinkan Anda untuk menjelajahi morfologi patogen. Sifat tinctorial bakteri sangat penting untuk penelitian praktis dan teoritis di bidang mikrobiologi.
Penelitian Mikroba
Dalam bakteriologi, ada banyak metode untuk pewarnaan mikroorganisme. Semuanya didasarkan pada sifat tinctorial bakteri. Pewarnaan memungkinkan Anda untuk menentukan bentuk, struktur, ukuran, posisi relatifnya. Hal ini memungkinkan pemecahan masalah sistematisasi jenis mikroorganisme biologi umum dan mikrobiologi komparatif.
Mengapa melukisnya
Bakteri praktisorganisme transparan, dan tanpa menggunakan pewarnaan, mereka kurang terlihat untuk mikroskop konvensional. Anda dapat menggunakan jenis mikroskop khusus (kontras fase, medan gelap) untuk mempelajari objek, tetapi cara termudah adalah dengan pewarnaan, setelah itu bakteri menjadi terlihat dalam mikroskop cahaya konvensional.
Persiapan sampel
Terlepas dari teknik pewarnaan yang digunakan, ada aturan yang seragam untuk mempersiapkan objek yang diteliti. Tahapan berikut ini wajib:
- Instrumen steril membuat apusan pada kaca objek.
- Sampel sedang dikeringkan. Ini dilakukan pada suhu kamar atau menggunakan lemari pengering.
- Diikuti oleh tahap fiksasi - mikroorganisme melekat pada kaca dengan senyawa khusus.
- Pewarnaan yang tepat - sampel ditutupi dengan pewarna untuk jangka waktu tertentu, setelah itu dicuci.
- Pengeringan akhir - sampel dikeringkan kembali.
Pewarna yang paling umum
Pewarna yang paling umum digunakan didasarkan pada anilin dengan nilai asam (pH) yang berbeda. Kebanyakan pewarna adalah bubuk yang diencerkan dalam alkohol.
Pewarna dengan kation sebagai zat pewarna disebut basa (pH lebih besar dari 7). Mereka dapat digunakan untuk mewarnai mikroorganisme dalam warna merah (magenta, safranin), violet (methyl violet, thionine), biru (methylene blue), hijau (malachite green), coklat (chrysoidin) dan hitam (indulin).
Pewarna, di mana zat pewarnanya adalah anion, disebut asam (pH kurang dari 7). Mereka akan menodai sampel menjadi merah (eosin), kuning (pikrin), atau hitam (nigrosin).
Ada sekelompok pewarna netral (misalnya, rhodamin B), di mana kation dan anion bertindak sebagai zat pewarna.
Budaya mati atau hidup
Metode pewarnaan dibagi menjadi dua kelompok sesuai dengan bentuk kehidupan benda uji.
- Pewarnaan vital (seumur hidup). Metode mempelajari sifat-sifat mikroorganisme ini digunakan dalam studi jaringan hidup, yang memungkinkan untuk mengamati proses vital mikroba. Untuk pewarnaan ini, digunakan pewarna dengan toksisitas rendah dan daya tembus tinggi.
- Pewarnaan pasca-vital. Ini adalah pewarnaan mikroorganisme yang mati atau terbunuh. Berkat sifat tinctorial bakteri, ahli mikrobiologi menentukan strukturnya. Pewarnaan inilah yang paling banyak digunakan.
Gram-positif dan Gram-negatif
Inilah ciri-ciri bakteri yang dapat ditemukan dalam petunjuk berbagai obat-obatan. Metode mempelajari sifat tinctorial bakteri ini didasarkan pada penggunaan pewarna ungu gentian dan fiksasi yodium. Ini adalah teknik Hans Christian Gram, seorang dokter Denmark yang mengusulkannya pada tahun 1884. Hasil pewarnaan ini, bakteri dibagi menjadi dua kelompok:
- Gram (+) - menjadi biru(staphylococci dan streptococci).
- Gram (-) - noda pink sampai merah (enterobacteria, salmonella, E. coli).
Hasil pewarnaan yang berbeda disebabkan oleh sifat tinctorial yang berbeda dari dinding bakteri. Metode pewarnaan Gram masih menjadi metode utama dalam mendiagnosis beberapa penyakit menular.
Teknik pewarnaan lainnya
Mari kita sebutkan beberapa metode lagi yang banyak digunakan dalam bakteriologi.
- Metode Ziehl-Nelson - menentukan ketahanan asam bakteri. Ini mengidentifikasi agen penyebab tuberkulosis dan mikobakteriosis.
- Teknik Romanovsky-Giemsa - pewarnaan bakteri acidophilic (asam asetat dan asam laktat) menjadi merah, dan basophilic (spirochetes dan protozoa) biru.
- Teknik Morozov - membuat bakteri menjadi coklat dan membuat flagela mereka terlihat.
Spora dapat dilihat
Pewarnaan fuchcin Tsiel memungkinkan Anda melihat spora bakteri. Memiliki warna merah muda setelah pewarnaan, mereka terlihat jelas dengan latar belakang bakteri biru. Metode ini juga merupakan alat bakteriologi dan sangat penting secara praktis.
